UNTUK MELIHAT JARINGAN PENGIKAT : Metode Allochrom (R.D. Lillie)

(untuk melihat jaringan pengikat) (Gurr,1960)

Reagen yang diperlukan :

A. Periodic Acid                       1% aquosa.

B. Basic Fuchsin                              1 gram

     Potassium metabisulphit           3,8 gram

     Hydrochloric acid N/15          200 ml

     Masukkan dalam botol, kemudian tutuplah botol dengan kain katun. Kocoklah dalam waktu 1-2 jam 

     hingga larut dan tercampur, dan terbentuklah larutan berwarna kuning pucat jernih. Selanjutnya 

     tambahkan 0,5-1 gram (karbon aktif), botol disumbat lagi dan kemudian kocoklah selama 

     beberapa menit, setelah itu disaring. Filtrat tidak berwarna.

C. Pottasium metabisulphit       0,5% aquosa

D. Haematoxylin Weigert, no. 1

E. Haematoxylin Weigert, no. 2

F. Picric Acid blue, aquosa           100 ml

    Methyl blue, aquosa                0,04 gram

   * Methyl blue tidak sama dengan methylene blue.

Prosedur

1. Jaringan dapat difiksasi dengan fiksasif yang diinginkan, kemudian dicuci, dehidrasi, penjernihan dan akhirnya penanaman dengan parafin.
2.  Irisan jaringan ditempel pada gelas benda, kemudian dilakukan deparafinasi dengan xylene.
3. Hidrasi dengan menggunakan alkohol bertingkat. Apabila menggunakan fiksatif yang mengandung sublimat, maka pada langkah ini jaringan tadi dicuci dengan iodin dan sodium sulfat.
4. Cuci dengan air, kemudian oksidasikan dalam reagen A selama 10 menit.
5. Cuci selama 5 menit dalam air mengalir.
6. Rendam dalam reagen B selama 10 menit.
7. Cuci dalam reagen C selama 30 detik.
8. Cuci selama 2 menit dalam reagen C lagi, kemudian ulangi lagi dalam reagen C yang baru selama 2 menit.
9. Cuci selama 5 menit dalam air mengalir.
10. Warnai selama 2 menit dalam campuran Weigert haematoxylin 1 dan 2 (dalam volume yang sama)
11. Cuci dalam air mengalir selama 4 menit.
12. Warnai selama 6 menit dalam reagen F.
13. Diferensiasi dan dehidrasi dengan alkohol 95% (2x), kemudian diganti alkohol absolut (2x).
14. Cuci dalam campuran alkohol absolut-xylene dalam volume yang sama.
15. Jernihkan 2 kali dalam xylene.
16. Tutup dalam D.P.X. atau clearmount atau crystalit atau emexel.

Hasil

Nukleat hitam atau abu-abu gelap. Collagen biru. Sitoplasma dan sel-sel otot hijau keabuan sampai hijau kekuningan. Sel-sel chromaffin sebagian merah sebagian biru. Amyloid terpulas merah jambu sampai merah keunguan. Jika jumlah methyl blue dalam reagen F ditambah sampai 0,4 gram, maka amyloid akan terpulas biru violet. Reticulum otot dan ephitelium membrana basalis berwarna biru sampai violet gelap, dan seringkali berwarna merah. Reticulin jaringan lympoid berwarna biru. Jaringan pengikat yang terletak antara kortex dan tubuli medulia ren terpulas biru cerah.

Catatan

 Metode ini dapat untuk membedakan antara serabut collagen (terpulas biru) dan membrana basalis (terpulas ungu kemerahan). Tetapi metode ini tidak cocok bila digunakan untuk membedakan antara serabut-serabut collagen dan serabut-serabut reticulin.